Ondes évanescentes (TIRF) | Plateforme Imagerie Sciences du Vivant

Lorsqu’une onde lumineuse se propage d’un milieu d’indice de réfraction élevé vers un milieu d’indice plus faible, elle peut subir une réflexion totale si l’angle d’incidence (par rapport à la normale de l’interface entre les milieux) est supérieur à un angle critique. Dans ce cas, seule une onde évanescente existe dans le second milieu, dont la profondeur de pénétration reste sub-longueur d’onde (typiquement 100 nm).

Cet effet est utilisé en microscopie pour confiner la lumière d’excitation sur une fine épaisseur au-dessus du substrat : la microscopie à réflexion interne totale (TIRF ou Total Internal Reflection Fluorescence) permet d’imager les fluorophores à l’interface, tout en s’affranchissant de la fluorescence hors focus provenant de l’épaisseur de l’échantillon. Cela améliore grandement le contraste des images et peut être appliqué à l’imagerie membranaire ou à la localisation de molécules uniques qui intervient dans les méthodes de super-résolution PALM (PhotoActivated Localization Microscopy) ou STORM (Stochastic Optical Reconstruction Microscopy) .

Des microscopes permettant une excitation TIRF sont disponibles sur les plateformes :
Microcell (IAB)
PIC (GIN)