Microscopie confocale

Le microscope confocal est un microscope à balayage où la fluorescence de l’échantillon est excitée point à point et filtrée à travers un diaphragme en trou d'épingle (pinhole). Il a l’avantage de permettre un sectionnement optique, c’est-à-dire de ne voir qu’une seule tranche de l’échantillon, ce qui rend possible une visualisation en 3D par l’acquisition de plans successifs. Ce type de microscope est disponible sur de nombreuses plateformes :
Microcell (IAB)
PIC (GIN)
PLATIV (TIMC)
LIPhy
CiMetaB (LBFA)

La microscopie confocale se décline aujourd'hui au travers de plusieurs modalités. La microscopie biphotonique utilise une excitation à deux photons. Elle combine les principes de la microscopie de fluorescence et de l'absorption biphotonique qui ne se produit qu'au point focal conférent un sectionnement optique intrinsèque. L'excitation est généralement dans le proche infrarouge ce qui limite également la diffusion dans les tissus. Ces deux aspects permettent ainsi d'atteindre des profondeurs plus importantes qu'en microscopie monophotonique ainsi qu'un photoblanchiment et une phototoxicité moindres. Il est également possible de visualiser certaines molécules telles que le collagène et autres molécules non centrosymétriques sans aucun marquage en exploitant les propriétés de l'optique non linéaire (génération de seconde harmonique). Cette technique est disponible sur la plateforme Microcell (IAB).

Certains microscopes confocaux sont équipés de scanners résonnants ou encore de disques rotatifs permettant d'augmenter significativement les vitesses d'acquisitions afin de suivre des processus cellulaires rapides.

En utilisant une excitation multiplexée et une détection par caméra, le microscope confocal à disque rotatif (spinning-disk) est une version plus rapide du microscope confocal, au prix d’une petite dégradation de la résolution axiale et d'une moindre flexibilité (taille de pinhole fixe). Il est particulièrement adapté à l'imagerie sur cellules vivantes. Ce type d’équipement est disponible sur les plateformes suivantes :
Microcell (IAB)
PIC (GIN)

Enfin, une technique exploitant le principe de l'illumination structurée à l'aide d'une grille mobile projetant sur le plan focal un motif strié et générant un sectionnement optique par calcul. Extension d'un microscope plein champ, elle se classe comme une méthode dite pseudo-confocale (Apotome) pour des échantillons de faible épaisseur (<20um) et fixés. Elle est disponible sur la plateforme Microcell (IAB).